ÿþAttivazione di ASIC mediante pH acido esterno. A, corrente reebok scarpe rappresentativa di acido Na rappresentata con potenziale di trattenimento di -60 mV in un ovocita. La linea continua sopra la traccia mostra il periodo di applicazione del pH acido (10 s). B, corrente rappresentativa interna di Na in un ovocita che esprime ASIC1a / 2a. La distanza indicata dalla coppia di frecce sinistra è il tempo necessario per raggiungere la corrente di picco (vedi "Procedure sperimentali"). La linea tratteggiata sovrapposta alla traccia è stata prodotta adattando il componente della corrente di sensibilizzazione con una funzione di decadimento esponenziale del primo ordine per calcolare la costante di tempo di inattivazione (Ä i).

La riduzione del pH e (4.0) non ha avuto alcun effetto su I Na negli ovociti iniettati in acqua (Figg. 2 e 3). Per esaminare l'effetto dell'attivazione del CFTR sugli ASIC, abbiamo prima testato l'effetto di una miscela che eleva i cAMP su ASIC1a / 2a. Dopo l'applicazione di questa miscela che eleva i cAMP, l'Ip normalizzato è diminuito al 92 ± 5,1% (n = 5, p> 0,05) del suo valore prima dell'applicazione della reebok classic miscela. Negli ovociti che co-esprimono ASIC1a / 2a con CFTR, ASIC1a / 2a I p è stato aumentato del 220 ± 31%. L'applicazione della miscela elevante i cAMP ha prodotto una saturazione della corrente CFTR e non ha influenzato in modo significativo la corrente ASIC1a / 2a protonata ("1665 ± 974 nA senza miscela contro "1502 ± 842 nA con miscela, reebok 85 club c n = 6, p> 0.05).

Per affrontare il problema di una possibile dipendenza intracellulare di sodio dalla regolazione di ASIC da parte di CFTR, abbiamo co-espresso CFTR con un mutante di guadagno di funzione di ASIC2a, vale a dire G430F. Come mostrato nella Figura 8, l'espressione di G430F-ASIC2a da sola mostrava una corrente di Na verso l'interno costitutivamente attivata a pH e 7,5. L'applicazione del pH acido e (4.0) ha smascherato una nuova conduttanza Na sensibile all'acido aggiuntiva in 6 di 7 ovociti che esprimono G430F-ASIC2a. La corrente Na sensibile all'acido associata a G430F-ASIC2a ha impiegato fino a 8 s per raggiungere la sua attività massima e non ha mostrato alcuna tendenza a inattivarsi durante il periodo di osservazione (10 s).

Se la reebok crossfit co-espressione CFTR aumenta la velocità della carica positiva che fluisce attraverso il canale eteromultimico ASIC1a / 2a, anche il potenziale di membrana dovrebbe essere regolato dal pH acido e. Questa idea è stata testata nell'attuale modalità di bloccaggio usando lo stesso protocollo per l'applicazione di pH e acido. Il potenziale di membrana a riposo medio di ovociti non iniettati a pH e 7,5 era "43 ± 5 mV (n = 10, 3 rane) e "35 ± 2 mV (n = 57, 11 rane) per gli ovociti iniettati ASIC1a / 2a e "42 ± 2 mV (n = 38, 6 rane, Fig. 9) per ovociti iniettati con CFTR ASIC1a / 2a. Come mostrato in Fig. 9 C, la variazione netta del potenziale massimo di membrana depolarizzata (” E m) a pH e 4.0 negli ovociti che co-esprimono ASIC1a / 2a con CFTR era di 39 ± 3 mV (n = 6), significativamente maggiore ( pn = 6).

Pertanto, l'interazione tra CFTR ed ENaC / DEG è specifica e non dovuta a un errore artefatto derivante da una serie non compensata e resistenza della membrana. Cationi equivalenti come Ca 2 e Mg 2 possono modulare sia l'attività ENaC che ASIC (17, 29, 49 , 53-55). Di recente, de Weille e Bassilana (49) hanno dimostrato che la Ca 2 esterna regolava ASIC1a e ASIC2a in modo diverso. Inoltre, la Ca 2 intracellulare ha interessato solo ASIC1a. CFTR regola significativamente l'ASIC a un pH e più acido di 5,5 (Fig. 5 B) in contrasto con gli effetti di Ca 2 sugli ASIC, che è evidente solo a pH e 7,0 reebok nano 8 (55).

La sovraregolazione degli ASIC da parte del CFTR implica che nella fibrosi cistica, l'attenuazione relativa degli ASIC nel cervello è meno sensibile alle variazioni del pH in assenza di CFTR normale. Inoltre, il CFTR stesso regola il trasporto transmembranico di protoni e, quindi, modula l'attività sinaptica (13, 16). Poiché gli ASIC possono anche rispondere ad altri stimoli, tra cui Phe-Met-Arg-Phe-ammide e altre sostanze neuromodulanti (32), l'up-regolazione degli ASIC mediante CFTR può contribuire alla funzione neuronale motoria e sensoriale, ad esempio la modulazione del nocicettivo trasmissione sinaptica (cioè dolore, un sintomo più comune della fibrosi cistica) alterando la sensibilizzazione centrale (59).